激光共聚焦
激光共聚焦：聚焦顯微技術（Confocal microscopy）是通過激光掃描共聚焦顯微鏡來獲取細胞內某個薄層面上的熒光信息, 并結合計算機自動控制和信息收集功能，對熒光信號的分布、強度和動態變化進行較好的的分析和整合, 從而得到豐富的細胞信息。 消除了聚焦平面以外的熒光信號的干擾, 故成像清晰。可以對樣品不同層面進行連續逐層掃描, 再由計算機將這些圖形重組為三維圖像，圖形清晰度高、層次分明、立體感更強。可對細胞某個選定結構進行長度和體積的測量, 在分析細胞空間結構和某些物質的胞內定位方面具有明顯的優勢，可同時實現多重指標的檢測。目前，該技術應用范圍已擴展到細胞學、微生物學、發育生物學、遺傳學、神經生物學、生理和病理學等學科，成為現代生物學微觀研究的重要工具。
激光共聚焦實驗前的步驟
1、做細胞爬片（爬片的步驟就不詳述了），注意：洗片子的PBS和固定用的4%多聚甲醛要新鮮配制的（一周以內的都能用）， 因為PBS和4%多聚甲醛放久了后，都會有自發熒光。
2、抗體的孵育：預實驗的時候熒光根據文獻和經驗設定一、二抗的濃度，一抗4度孵育過夜（時間8～12h）；二抗（熒光抗體）孵育時要避光，孵育好后用PBS充分沖洗；可以將做好的片子直接在板子中孵育，如果從節約的角度來看，可以用12或24孔板比較好。
3、做好以上步驟后，將板子里放點PBS，保存片子濕潤，不要干片，這樣會影響細胞形態。
4、到激光共聚焦觀察室后，再將爬片取出，在干凈的載玻片上滴一滴50%的甘油，然后將爬片取出來倒扣在滴過甘油的載玻片上（即細胞在2層玻片之間，不要反了哦；還有千萬不要用中性樹膠封片！
5、顯微鏡下觀察即可
