TUNEL檢測
一、服務介紹
細胞凋亡是指為維持內環境穩定，由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同，細胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用，它并不是病理條件下，自體損傷的一種現象，而是為更好地適應生存環境而主動爭取的一種死亡過程。細胞凋亡是細胞的一種基本生物學現象，在多細胞生物去除不需要的或異常的細胞中起著必要的作用。它在生物體的進化、內環境的穩定以及多個系統的發育中起著重要的作用。細胞凋亡不僅是一種特殊的細胞死亡類型，而且具有重要的生物學意義及復雜的分子生物學機制。凋亡是多基因嚴格控制的過程。
二、TUNEL檢測實驗原理
TUNEL檢測（terminal
dexynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP nick end labeling，末端脫氧核苷酸轉移酶介導的dUTP 缺口末端標記測定法），也稱DNA斷裂的原位末端標記法。細胞凋亡中染色體DNA的斷裂是個漸進的分階段的過程，染色體DNA在內源性的核酸水解酶的作用下降解為50-300 kb的大片段，然后大約30%的染色體DNA在Ca2+和Mg2+依賴的核酸內切酶作用下，在核小體單位之間被隨機切斷，形成180～200 bp核小體DNA多聚體。DNA雙鏈斷裂或只要一條鏈上出現缺口而產生的一系列DNA的3’-OH末端可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸化酶或生物素形成的衍生物標記到DNA的3’-末端，再用辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素與衍生物上生物素結合（每個鏈霉親和素至少可以再結合3個生物素分子），后用DAB、過氧化氫與辣根過氧化物酶發生氧化、環化反應，形成苯乙肼聚合物而呈現棕褐色，終通過計數每張切片上不同視野中TUNEL陽性細胞的比例來判斷細胞凋亡發生情況。由于正常的或正在增殖的細胞沒有DNA的斷裂，因而沒有3’-OH形成，很少能夠被染色。
三、TUNEL檢測實驗流程
1、收集處理后的細胞或石蠟切片脫蠟至水。
2、過氧化氫甲醇中浸洗，抑制內源性過氧化氫酶。
3、用蛋白酶K室溫孵育15~30分鐘。
4、滴加TUNEL反應混合液（即配即用，4oC避光），孵育60分鐘，在熒光鏡下（綠色）分析結果。
5、加入轉化劑-POD，孵育20~30 min。
6、加入DAB底物溶液，孵育5~10 min。
8、中性樹膠或者甘油封片，光鏡下分析結果。
