活性氧(reactive oxygen species, ROS)是生物體內一些氧化反應中形成的氧自由基,常見有超氧化陰離子(O2-),過氧化氫(H2O2),過氧化自由基(ROO-)和氫氧自由基(OH-)等形式。自由基外層具有非配對電子,其化學性質非?;顫?,它既是電子供體,又是電子受體?;钚匝跏巧顒又胁豢扇鄙俚幕钚晕镔|。自由基在體內可提高一些酶的活性,如核苷酸的合成和肝臟的**過程中,自由基可激活某些合成酶或**酶。自由基還參與機體內一些活性物質如前列腺素的合成。炎癥過程中,自由基可促進炎性細胞吞噬**和殺死**,如中性粒細胞發生呼吸爆發時產生大量自由基,可殺死病原體。
ROS更多被賦予明確的病理意義。ROS可對細胞膜結構、核酸和蛋白分子產生氧化作用,引起其結構和功能障礙。ROS增多導致機體氧化應激反應(Oxidative Stress)造成細胞損傷,參與多種病理機制。百種以上的疾病狀態都可能有ROS的參與。機體通過一系列抗氧化機制,維持ROS的平衡,如超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)、過氧化氫酶(Catalase)等酶類和一些小分子還原物質,可去除細胞生成的ROS。檢測細胞ROS的含量,可以了解ROS在細胞一些生理和病理狀態中的變化,分析藥物效應和相關機制。
ROS檢測原理:活性氧檢測時會利用熒光探針DCFH-DA。DCFH-DA本身沒有熒光,可以自由穿過細胞膜,進入細胞內后,可以被細胞內的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細胞膜,從而使探針很容易被裝載到細胞內。細胞內的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細胞內活性氧的水平。